· poliacrilamidăGelul trebuie să fie prin monomer acrilamidă, material de pornire a polimerizării, catalizator și dreptul de sare și amestec tampon împreună.
· acrilamidăiar bis (n, n '- metilen dublu acrilamidă) este matricea de gel de formă monomer.
· Procesul de polimerizare adezivă a persulfatului de amoniu. Formularea lipiciului necesită 10% soluție de persulfat de amoniu preparată în apă. Majoritatea informațiilor au indicat o nevoie de utilizare activă. Cu toate acestea, soluția de 10% poate fi plasată la 4 ℃ timp de câteva săptămâni, fără pierderi semnificative de activitate. Faceți până la 10 ml și aruncați atunci când lipiciul nu reușește să se aglomereze.
Sfat: procentul deacrilamidăÎn secvențarea lipiciului și lipiciului proteic nu este același lucru. Dacă utilizați acrilamidă premade: soluție BIS, asigurați -vă că obțineți sticla potrivită.
· Temed (n, n, n ', n'- tetrametil etilendiamina) este un catalizator, într-o sticlă maro, plasat la frigider. Adăugați chiar înainte de a turna lipici.
· Electroforeza poliacrilamidă utilizată sticla în electroforeză trebuie spălată înainte și după fiecare dată. După electroforeză, spălați cu o perie moale și o cârpă în apă cu săpun fierbinte, clătiți cu apă distilată și stați la uscat.
· Umiditatea și praful pot provoca cu polimer gol. Înainte de electroforeză, curățați placa de sticlă cu curățătorul de sticlă și ștergeți -o cu o perie moale. Spălați cu apă distilată și uscați bine cu o ștergere de hârtie. Clătirea cu 70% etanol înainte de a șterge cu hârtie ajută la curățarea și la accelerarea uscării. Adăugați probe de acrilamidă succesiv: bis, apă, soluție tampon, persulfat de amoniu, temed. Se agită bine și se toarnă imediat.
Nu este necesar să se degasi poliacrilamidă înainte de polimerizare. (Acrilamida obișnuia să fie plasată într -un vid pentru a îndepărta bule, deoarece oxigenul inhibă polimerizarea.)
Sfaturi de probă orizontale de lipici.
· Puneți o bucată de hârtie neagră în cutia de jos, fundal negru pentru a face niște gaură de probă pentru a vedea mai clar.
· Tampon umplut cu rezervor de lipici, chiar peste coloid.
· Dacă marginea are o lumină, aprindeți luminile, lăsați lumina să strălucească coloid. Trageți proba în pipetă.
· Utilizarea dispozitivului de pipetare automată.
· În 10-200 MU 1 punct de mișcare lichid poate fi utilizat în majoritatea punctelor de pe eșantion. Pentru găurile de probă foarte mici (mai puțin de 10μ1), capul de pipetă lung utilizat pentru secvențarea lipiciului este mai convenabil.
· Pipetarea doar cufundată în eșantion, inhalând lichidul în mișcare lentă. Proba poate apărea lipicioasă cu glicerină, iar pomparea rapidă poate atrage bule de aer în capul pipetei.
· Probele după inhalarea capului de pipetare, vor muta ușor capul fluidului pe marginea conductei sau ștergerea hârtiei aspiră capul lichid în afara picăturilor. Aveți grijă să nu sugeți proba.
Puneți proba în gaura eșantionului
· Dispozitiv de pipetare Pentru a menține o presiune mică, faceți ca probele să se miște ușor cu capul lichid de preaplin.
· Capul de pipet introdus în tampon, puțin mai mare decât găurile spot, menține presiune pozitivă. Vârful pipetei poate fi introdus într -o gaură mică.
· Încet și constant probele. Vârful pipetei este plasat deasupra orificiului eșantionului, iar proba se va scufunda în gaură. Lăsați eșantionul să se scufunde pentru a umple gaura de probă în loc să împingă.
· Odată ce ultima picătură de probă cu cap de lichid, lichidul se va muta pe al doilea picior, va ridica încet mișcarea lichidului, mutați -vă din tampon
Cum se face prelevare de lipici verticală?
· Găuri de probă cu punct de lipici vertical formate între două bucăți de sticlă. În lipici foarte subțire, capul de pipetă nu poate fi introdus nici măcar între două plăci de sticlă. Urmăriți glicerina! Puneți capul pipetei peste gaura eșantionului și proba se va scufunda în gaură.
· Eșantion de punct înainte, asigurați -vă că puneți punctul vertical al eșantionului de gel de polipropilen acil este curat. Spălați acrilamida nepolimerizată și apa care poate apărea în partea de jos a găurii de probă. Apa poate face ca gaura de probă să fie semnificativ mai mică. Folosiți o seringă de 25 ml sau 50 ml și un ac de calibru 18. Turnați în tamponul de electroforeză și spălați cu atenție gaura de probă.
· Poate fi dificil să vezi gaura eșantionului, dar la fel, restul este ușor. Dacă există găuri în exces, tamponul de probă poate fi testat cu albastru de bromofenol.
Timpul post: 31-2023